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  • 호흡성 유해물질에 의한 식세포 기능 손상과 호흡기 면역반응과의 관계 규명

    (1711162921)

    2022

    개인기초연구(과기정통부)

    박은정

    경희대학교

    과학기술정보통신부

    35174000 (35174000)

    「연구개발성과」 : 논문(1) , 연구보고서(1)

    인간이 생활하며 노출되는 환경 중의 생물학적, 물리-화학적 위해 요소는 암, 치매, 심혈관계 질환과 같은 사회적 비용 부담이 큰 만성, 노인성질환의 주요 원인물질로 제시되고 있음. 한편, 불특정, 복합성분을 갖는 환경 중 유해물질은 장기간에 걸쳐 반복적, 지속적으로 인체에 노출되므로 체내 면역계에서는 특정 병원균에 대한 면역반응과는 달리 복잡 다양한 유해물질을 제거하기 위한 선천성 및 후천성 면역반응이 '동시에' '항시' 작동되고 있음. 더불어, 외부 이물질이 항원제시세포에 의해 항원으로 제시되기 위해서는 항원제시세포 내 리소좀에서 분해되어 '펩타이드'로 만들어져야 함. 그러나, 미세먼지, 미세플라스틱, 제조나노물질 등 생물학적 성분을 함유하지 않는 환경 중 유해물질의 경우는 항원으로 제시될 수 있는 펩타이드 성분을 함유하지 않음. 더 나아가, 본 연구자가 수행한 연구 결과에서, 다양한 환경 중 유해물질에 의해 'phagocytes의 구조적 손상과 항원제시세포의 기능적 결함'이 유도될 수 있다는 것이 관찰되었으며, '죽은 또는 죽어가는 세포를 제거하는 과정에서 생산되는 염증반응이 중요한 체내에서 일어나는 병리현상에 중요하게 기여한다는 것을 알 수 있었음. 이에 본 연구에서는, 호흡기 내 탐식기능을 갖는 세포의 기능을 손상시키는 환경 중 유해물질의 물리-화학적 특성을 바탕으로 호흡기 내 phagocytes의 기능 손상에 따른 면역 불균형의 유형과 병리적 현상을 관찰함으로써 환경유해물질에 의한 특발성 폐섬유증, 폐암과 같은 호흡기 질환의 발병 기전을 면역독성학적인 관점에서 심도있게 이해하고자 함.

    ㅇ 연차별 목표- 1차년도: 세포 구성 성분의 손상과 염증 발생과의 관계 분석- 2차년도: Phagocytes의 손상 (또는 cell death) 유형과 염증 발생과의 관계 분석 1) 시험물질 ㅇ 세포막 손상에 따른 cell-to-cell communication에 대한 영향 분석 (살균, 소독제 성분 이용) ㅇ 정전기적 인력에 의해 penetration되어 세포질에 free한 형태로 존재하는 물질에 의한 탐식기능 손상 관찰 (나노물질 이용)ㅇ Phagocytes의 손상 (세포사) 유형에 따른 영향 분석- 기존 연구결과를 바탕으로 물질간 비교- Paraptosis유도 물질 (표준 실리카 나노입자)- Autophagic cell death 유도물질 (자성 철나노 이용)- Apoptotic cell death 유도 물질 (아연 나노입자 이용)ㅇ Incomplete phagocytosis에 의해 발생되는 면역 기능 손상 분석- 석면, 나노파이버 이용 (동물실험 완료)2) 동물시험ㅇ OECD 시험 가이드라인 상의 종말점 분석: 체중, 먹이 및 음용수 섭취량, 조직 중량, 혈액학적, 혈액생화학적 분석 수행. 혈액 및 조직 병리 분석은 안전성평가연구소와 공동 연구로 수행ㅇ phagocytes의 기능 손상에 따른 면역반응과 병리현상 관찰- 폐포 및 폐 조직 내 phagocytes로의 이물질 유입에 따른 세포형태학적 변화 관찰 - 폐 및 혈액 내 염증관련 매개인자 농도 측정: MMPs, Chemokines, Cytokines 등- 이물질에 대한 노출에 따른 항체생산력 (혈액 내 면역글로불린 농도)의 변화 측정- 폐포 내 세포의 표면에 발현된 receptor 또는 ligand 수준을 FACS system을 이용하여 분석- 시험물질 투여에 따른 폐 내 총 세포수, 세포 조성, cell death 유도 여부 및 유형 관찰ㅇ 폐 조직 내 분자생물학적 변화 관찰- 마이크로어레이 및 PCR기법을 이용한 유전자 profile 작성 및 농도의존적 변화 관찰- 단백질 발현의 정량적 변화 관찰3) 세포시험ㅇ 세포주: 기관지 상피세포 (BEAS-2B), 폐 섬유아세포 (HFL-1), 폐포 마크로파지 세포 (MH-S)ㅇ 세포소기관 특정 지표를 이용하여 소기관의 구조 및 기능에 대한 영향 분석 ㅇ 세포독성 기전에 따른 surface molecules발현 변화와 염증 반응 간의 상관성 분석ㅇ Co-culture system을 이용한 neutrophil migration 및 섬유아세포 활성에 대한 영향 분석

    1) 학문적 중요성- 환경 중 유해물질에 의한 조직손상 및 질환 발생 기전을 규명하기 위한 다양한 시험을 통해 학문적, 실험적 경험을 축적함으로써 환경성질환 분야에서 국제적 수준의 연구자로 발돋움함. - 연구를 통해 얻어진 경험과 지식을 후배 연구자에게 전달함으로써 환경성 질환 발생 관련 전문가 양성에 기여함. 2) 산업적 중요성- 제품에 사용된 성분의 기능, 발생 가능한 인체 노출 시나리오, 각 성분과 생체 시스템과의 상호작용에 대한 이해를 통해 보다 안전한 제품 개발을 위한 기초자료를 제공하고, 환경 중 유해물질에 의해 발생 가능한 면역기능이상 (질환)을 개선할 수 있는 전략을 수립하는데 기초적인 자료를 제공함. 3) 정책적 중요성- 환경부는 2020년부터 석면유도발암환자가 증가할 것으로 예상하고 있으나, 그 발암 기전이 명확하지 않아 그 치료 가이드라인 개발에 어려움을 겪고 있음. 석면 및 석면 양 나노물질을 이용한 연구를 통해 석면유도질환 환자의 치료 가이드라인 개발 및 예후개선에 기여하고자 함. - 환경적 요인의 물리-화학적, 생물학적 특성에 대한 분석과 함께, 이들 환경적 요인에 의한 만성질환의 발병 기전을 규명하고, 이를 예방 및 조기 진단할 수 있는 방안을 제시함으로써 (초)고령사회에서 가장 큰 사회적 문제로 제기되고 있는 보건, 의료비 감축 및 청장년층의 더블케어 부담을 감소하고 보다 건강한 사회구조를 형성하는 데 기여할 수 있을 것으로 판단됨.

  • 호흡성 유해물질에 의한 식세포 기능 손상과 호흡기 면역반응과의 관계 규명

    (1711136122)

    2021

    개인기초연구(과기정통부)(R&D)

    박은정

    경희대학

    과학기술정보통신부

    34821000 (34821000)

    인간이 생활하며 노출되는 환경 중의 생물학적, 물리-화학적 위해 요소는 암, 치매, 심혈관계 질환과 같은 사회적 비용 부담이 큰 만성, 노인성질환의 주요 원인물질로 제시되고 있음. 한편, 불특정, 복합성분을 갖는 환경 중 유해물질은 장기간에 걸쳐 반복적, 지속적으로 인체에 노출되므로 체내 면역계에서는 특정 병원균에 대한 면역반응과는 달리 복잡 다양한 유해물질을 제거하기 위한 선천성 및 후천성 면역반응이 '동시에' '항시' 작동되고 있음. 더불어, 외부 이물질이 항원제시세포에 의해 항원으로 제시되기 위해서는 항원제시세포 내 리소좀에서 분해되어 '펩타이드'로 만들어져야 함. 그러나, 미세먼지, 미세플라스틱, 제조나노물질 등 생물학적 성분을 함유하지 않는 환경 중 유해물질의 경우는 항원으로 제시될 수 있는 펩타이드 성분을 함유하지 않음. 더 나아가, 본 연구자가 수행한 연구 결과에서, 다양한 환경 중 유해물질에 의해 'phagocytes의 구조적 손상과 항원제시세포의 기능적 결함'이 유도될 수 있다는 것이 관찰되었으며, '죽은 또는 죽어가는 세포를 제거하는 과정에서 생산되는 염증반응이 중요한 체내에서 일어나는 병리현상에 중요하게 기여한다는 것을 알 수 있었음. 이에 본 연구에서는, 호흡기 내 탐식기능을 갖는 세포의 기능을 손상시키는 환경 중 유해물질의 물리-화학적 특성을 바탕으로 호흡기 내 phagocytes의 기능 손상에 따른 면역 불균형의 유형과 병리적 현상을 관찰함으로써 환경유해물질에 의한 특발성 폐섬유증, 폐암과 같은 호흡기 질환의 발병 기전을 면역독성학적인 관점에서 심도있게 이해하고자 함.

    ㅇ 연차별 목표- 1차년도: 세포 구성 성분의 손상과 염증 발생과의 관계 분석- 2차년도: Phagocytes의 손상 (또는 cell death) 유형과 염증 발생과의 관계 분석 1) 시험물질 ㅇ 세포막 손상에 따른 cell-to-cell communication에 대한 영향 분석 (살균, 소독제 성분 이용) ㅇ 정전기적 인력에 의해 penetration되어 세포질에 free한 형태로 존재하는 물질에 의한 탐식기능 손상 관찰 (나노물질 이용)ㅇ Phagocytes의 손상 (세포사) 유형에 따른 영향 분석- 기존 연구결과를 바탕으로 물질간 비교- Paraptosis유도 물질 (표준 실리카 나노입자)- Autophagic cell death 유도물질 (자성 철나노 이용)- Apoptotic cell death 유도 물질 (아연 나노입자 이용)ㅇ Incomplete phagocytosis에 의해 발생되는 면역 기능 손상 분석- 석면, 나노파이버 이용 (동물실험 완료)2) 동물시험ㅇ OECD 시험 가이드라인 상의 종말점 분석: 체중, 먹이 및 음용수 섭취량, 조직 중량, 혈액학적, 혈액생화학적 분석 수행. 혈액 및 조직 병리 분석은 안전성평가연구소와 공동 연구로 수행ㅇ phagocytes의 기능 손상에 따른 면역반응과 병리현상 관찰- 폐포 및 폐 조직 내 phagocytes로의 이물질 유입에 따른 세포형태학적 변화 관찰 - 폐 및 혈액 내 염증관련 매개인자 농도 측정: MMPs, Chemokines, Cytokines 등- 이물질에 대한 노출에 따른 항체생산력 (혈액 내 면역글로불린 농도)의 변화 측정- 폐포 내 세포의 표면에 발현된 receptor 또는 ligand 수준을 FACS system을 이용하여 분석- 시험물질 투여에 따른 폐 내 총 세포수, 세포 조성, cell death 유도 여부 및 유형 관찰ㅇ 폐 조직 내 분자생물학적 변화 관찰- 마이크로어레이 및 PCR기법을 이용한 유전자 profile 작성 및 농도의존적 변화 관찰- 단백질 발현의 정량적 변화 관찰3) 세포시험ㅇ 세포주: 기관지 상피세포 (BEAS-2B), 폐 섬유아세포 (HFL-1), 폐포 마크로파지 세포 (MH-S)ㅇ 세포소기관 특정 지표를 이용하여 소기관의 구조 및 기능에 대한 영향 분석 ㅇ 세포독성 기전에 따른 surface molecules발현 변화와 염증 반응 간의 상관성 분석ㅇ Co-culture system을 이용한 neutrophil migration 및 섬유아세포 활성에 대한 영향 분석

    1) 학문적 중요성- 환경 중 유해물질에 의한 조직손상 및 질환 발생 기전을 규명하기 위한 다양한 시험을 통해 학문적, 실험적 경험을 축적함으로써 환경성질환 분야에서 국제적 수준의 연구자로 발돋움함. - 연구를 통해 얻어진 경험과 지식을 후배 연구자에게 전달함으로써 환경성 질환 발생 관련 전문가 양성에 기여함. 2) 산업적 중요성- 제품에 사용된 성분의 기능, 발생 가능한 인체 노출 시나리오, 각 성분과 생체 시스템과의 상호작용에 대한 이해를 통해 보다 안전한 제품 개발을 위한 기초자료를 제공하고, 환경 중 유해물질에 의해 발생 가능한 면역기능이상 (질환)을 개선할 수 있는 전략을 수립하는데 기초적인 자료를 제공함. 3) 정책적 중요성- 환경부는 2020년부터 석면유도발암환자가 증가할 것으로 예상하고 있으나, 그 발암 기전이 명확하지 않아 그 치료 가이드라인 개발에 어려움을 겪고 있음. 석면 및 석면 양 나노물질을 이용한 연구를 통해 석면유도질환 환자의 치료 가이드라인 개발 및 예후개선에 기여하고자 함. - 환경적 요인의 물리-화학적, 생물학적 특성에 대한 분석과 함께, 이들 환경적 요인에 의한 만성질환의 발병 기전을 규명하고, 이를 예방 및 조기 진단할 수 있는 방안을 제시함으로써 (초)고령사회에서 가장 큰 사회적 문제로 제기되고 있는 보건, 의료비 감축 및 청장년층의 더블케어 부담을 감소하고 보다 건강한 사회구조를 형성하는 데 기여할 수 있을 것으로 판단됨.

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